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本制品使用的G5S Plus High-Fidelity DNA Polymerase融合Q5和Q5U的性能于一体，使其成为一酶多用的全能选手。该酶来源于高保真DNA聚合酶，并加入了增强的延伸结构，使其具有超保真性能（与Q5同水平）、长片段扩增能力、高产量、dUTP渗入能力、扩增含有尿嘧啶模板的能力。使用该酶可轻松扩增8kb的基因组DNA、20kb的λDNA。该酶具有4kb/min以上的延伸速度。该酶具有5'-3'的聚合酶活性、强3'-5'的外切酶活性，产物为平末端。

• 以λDNA为模板，扩增20kb DNA片段；
  
• 以人类基因组DNA为模板，扩增8kb DNA片段。

• 2×HiFi Buffer包含反应缓冲盐、dNTP、Mg²⁺、溴酚蓝等。
  
• 引物、模板、酶浓度使用参考表
  

  在1×反应 体系下	引物浓度 (nM)	酶浓度 (U/μL)	模板浓度 (ng/μL)
  <2kb	200	0.02	基因组(0.01～1) 简单模板(0.01～0.1)
  2～4kb	100	0.03	基因组(0.05～2) 简单模板(0.01～0.1)
  >4kb	100	0.04	基因组(0.5～4) 简单模板(0.05～0.1)

• 扩增片段GC含量>60%时，推荐添加5×PCR增强剂(货号：MT0034)至1×浓度，来提升高GC含量的扩增性能。

• 按下表加入各成分配制PCR反应体系：
  

  成分	用量
  2×HiFi Buffer	10μL
  G5S Plus DNA聚合酶(2U/μL)	0.2μL
  上游引物(10μM)	0.4μL
  下游引物(10μM)	0.4μL
  模板DNA	X μL
  ddH2O	至20μL

• 推荐的万能PCR扩增程序
  

  步骤	温度	时间
  		<1kb	1～2kb	>2kb
  预变性	95℃	1min	1min	1min
  循环1 (5个循环)	95℃	10s	10s	10s
  	65℃	30s	45s	30s/kb
  循环2 (23个循环)	95℃	10s	10s	10s
  	55℃	10s	10s	10s
  	72℃	30s	45s	30s/kb
  终延伸	72℃	2min	2min	2min

  • 在实际应用中，引物TM值（50～70℃）范围内均获得良好的扩增。该程序扩增总循环数为28（5+23），如产物扩增亮度不足，则增加循环2的次数到25～28个，通常不宜超过28。
    
  • 如果仍然不能获得良好的扩增结果，则可以改变，循环2中的退火温度为50～65℃（上表中为55℃）。